Perfil imuno-histoquímico de marcadores associados à transição epitelial-mesenquimal em lesões odontogênicas epiteliais benignas / Immunohistochemical profile of markers associated with epithelial-mesenchymal transition in benign epithelial odontogenic lesions

Os cistos e tumores odontogênicos, lesões que acometem o complexo maxilomandibular, podem exibir comportamento clínico-biológico mais agressivo. E a transição epitelialmesenquimal (TEM), processo pelo qual as células epiteliais perdem propriedades fenotípicas e adquirem características de células mesenquimais, incluindo maior motilidade e capacidade de invasão, através da regulação de fatores centrais de transcrição e suas vias associadas, podem fazer parte de características associadas às lesões odontogênicas. Dessa forma, o presente trabalho buscou analisar e comparar a expressão imuno-histoquímica de proteínas (Zeb1, Ecaderina, N-caderina e vimentina) envolvidas no processo de TEM, em lesões odontogênicas epiteliais benignas. A amostra consistiu em 88 casos de lesões odontogênicas, das quais compreendem 28 casos de ameloblastoma (AB), 30 de ceratocisto odontogênico (CO) e 30 de cisto dentígero (CD). Todos os espécimes submetidos à técnica imuno-histoquímica foram avaliados por microscopia de luz, e submetidos à escolha aleatória de 5 (cinco) campos, os quais foram fotografados em um aumento de 400x. A avaliação da expressão de cada marcador, a partir da análise em seu compartimento celular específico, foi feita de forma semiquantitativa, através da multiplicação dos escores associados à porcentagem de células imunomarcadas pelos escores relacionados à intensidade da coloração, sendo feita uma média dos cinco campos e o resultado definido como baixa expressão ou alta expressão, conforme metodologia utilizada. As associações foram feitas através do teste de Qui-quadrado e as correlações através do teste de correlação de Spearman. O nível de significância foi estabelecido em 5% (p < 0,05). Os resultados mostraram um pico de prevalência entre a 2ª e 3ª décadas de vida, em todas as lesões estudadas, com um acometimento maior em região posterior de mandíbula, e os ABs foram as lesões de maiores tamanhos, com 65% medindo acima de 2,5cm. A imuno-histoquímica evidenciou baixa expressão de Zeb1 em epitélio odontogênico das lesões estudadas, alta expressão de E-caderina e N-caderina, e uma expressão intermediária de vimentina. Quando realizada a correlação entre os marcadores, observou-se nos casos de AB uma correlação positiva e moderada entre Zeb1 nuclear e E-caderina membranar, Zeb1 citoplasmática e E-caderina membranar e entre E-caderina e vimentina citoplasmáticas. Como também uma correlação positiva moderada, nos casos de CD, entre Zeb1 nuclear e vimentina citoplasmática, e entre Zeb1 e vimentina citoplasmáticas. Logo, podemos concluir que Zeb1 pode estar atuando indiretamente nas vias responsáveis pelo crescimento e características morfológicas dessas lesões estudadas. Além disso, a expressão diferencial de E-caderina, Ncaderina e vimentina demonstraram fazer parte de um processo de TEM parcial nas lesões odontogênicas epiteliais benignas estudadas (AU).

Odontogenic cysts and tumors, lesions that affect the maxillomandibular complex, may exhibit a more aggressive clinical-biological behavior. And the epithelial-mesenchymal transition (EMT), a process by which epithelial cells lose phenotypic properties and acquire characteristics of mesenchymal cells, including increased motility and invasiveness, through the regulation of central transcription factors and their associated pathways, may be part of characteristics associated with odontogenic lesions. Thus, the present work sought to analyze and compare the immunohistochemical expression of proteins (Zeb1, E-cadherin, N-cadherin and vimentin) involved in the MET process in benign epithelial odontogenic lesions. The sample consisted of 88 cases of odontogenic lesions, comprising 28 cases of ameloblastoma (AB), 30 of odontogenic keratocyst (CO) and 30 of dentigerous cyst (CD). All specimens submitted to the immunohistochemical technique were evaluated by light microscopy and submitted to the random choice of 5 (five) fields, which were photographed at a magnification of 400x. The evaluation of the expression of each marker, based on the analysis in its specific cellular compartment, was carried out in a semi-quantitative manner, through the multiplication of the scores associated with the percentage of immunostained cells by the scores related to the intensity of staining, with an average of the five fields and the result defined as low expression or high expression, according to the methodology used. The associations were made using the chi-square test and the correlations using the Spearman correlation test. The significance level was set at 5% (p < 0.05). The results showed a prevalence peak between the 2nd and 3rd decades of life, in all the lesions studied, with a greater involvement in the posterior region of the mandible, and the ABs were the largest lesions, with 65% measuring above 2, 5cm. Immunohistochemistry showed low expression of Zeb1 in the odontogenic epithelium of the lesions studied, high expression of E-cadherin, high expression of N-cadherin and an intermediate expression of vimentin. When the correlation between the markers was performed, a positive and moderate correlation was observed in the cases of AB between nuclear Zeb1 and membrane E-cadherin, cytoplasmic Zeb1 and membrane E-cadherin and between cytoplasmic E-cadherin and vimentin. As well as a moderate positive correlation, in CD cases, between nuclear Zeb1 and cytoplasmic vimentin, and between cytoplasmic Zeb1 and vimentin. Therefore, we can conclude that Zeb1 may be acting indirectly on the pathways responsible for the growth and morphological characteristics of these lesions studied. Furthermore, the differential expression of E-cadherin, N-cadherin and vimentin was shown to be part of a partial TEM process in the benign epithelial odontogenic lesions studied (AU).

Evaluating mmp-2 and tgfß-ri expression in circulating tumor cells of pancreatic cancer patients and their correlation with clinical evolution / Avaliação da expressão de mmp-2 e tgfß-ri em células tumorais circulantes de pacientes com câncer de pâncreas e sua correlação com evolução clínica

ABSTRACT Background: Metastasis is common in the diagnosis of pancreatic cancer, and the presence of epithelial-mesenchymal transition markers in circulating tumor cells may suggest worse prognosis. Aim: To correlate the number of circulating tumor cells (CTCs) in the peripheral blood of patients with a locally advanced or metastatic pancreatic tumor and the protein expression involved in epithelial-mesenchymal transition (EMT) in CTCs with clinical characteristics, progression-free survival (PFS) and overall survival (OS). Method: This was a prospective study conducted using peripheral blood samples collected at three different times. CTCs were quantified by the ISET test and analyzed by immunocytochemistry. Proteins involved in EMT (vimentin, TGFß-RI and MMP2) were analyzed in all CTCs. Results: Twenty-one patients were included. Median CTCs detected were 22, 20 and 8 CTCs/8 ml blood at baseline, first and second follow-up, respectively. No statistically significant correlation was found in correlating the number of CTCs and the evaluated clinical characteristics, PFS, or OS. There was no difference in PFS and OS among the EMT markers in the groups with and without markers. Conclusion: CTC analysis was not relevant in this sample for comparing clinical findings, PFS and OS in patients with pancreatic cancer. However, marker analysis in CTCs could be useful for the MMP-2 and/or TGFß-RI expression, as observed by the separate PFS curve.

RESUMO Racional: A metástase é comum no diagnóstico de câncer de pâncreas; presença de marcadores de transição epitélio-mesenquimal nas células tumorais circulantes (CTCs) podem sugerir pior prognóstico. Objetivo: Correlacionar o número de CTCs no sangue periférico de pacientes com tumor de pâncreas localmente avançado ou metastático e expressão de proteínas envolvidas na transição epitélio-mesenquimal (TEM) nas CTCs com características clínicas, sobrevida livre de progressão (SLP) e global (SG). Método: Estudo prospectivo realizado por meio de coletas de sangue periférico em três tempos distintos. As CTCs foram quantificadas pelo sistema ISET e analisadas por imunocitoquímica. Proteínas envolvidas na TEM (vimentina, TGFß-RI e MMP2) foram analisadas em todas as CTCs. Resultados: Foram incluídos 21 pacientes. A mediana de CTCs detectadas foi de 22, 20 e 8 CTCs/8 ml de sangue no baseline, primeiro e segundo seguimentos, respectivamente. Na correlação entre número de CTCs e as características clínicas levantadas, SLP, SG não houve correlação estatisticamente significante. Nos marcadores de TEM não houve diferença de SLP e SG entre os grupos que apresentaram e não apresentaram marcação. Conclusão: As CTCs não se mostraram relevantes na comparação dos achados clínicos, SLP e SG em pacientes com câncer de pâncreas. No entretanto, pode ser que para a análise de marcador seja útil, como observado pelas curvas separadas de expressão de MMP-2 e TGFß-RI nas CTCs.

Identification of a subtype of poorly differentiated invasive ductal carcinoma of the breast based on vimentin and e-cadherin expression / Identificação de um subtipo pouco diferenciado de carcinoma ductal invasivo de mama, baseado na expressão da vimentina e E-caderina

Abstract Objective The use of molecular markers can identify a subgroup of tumors with distinct recurrence patterns. The present study aimed to characterize the immunohistochemical expression of vimentin (VIM), of E-cadherin (CDH1), and of cytokeratin 5 (CK5) in patients with invasive ductal carcinomas (IDCs). Methods We have constructed a tissuemicroarray (TMA) from87 patients with IDC of the breast. Immunohistochemistry (IHC) was performed to study the expression of estrogen and progesterone receptors (ER and PgR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2), VIM, CDH1, CK5, and Ki67. The tumors were classified as luminal A and B (n = 39), HER2 enriched (n = 25), and triple-negative (TNBC) (n = 23), based on the IHC expression. Results We have observed that luminal A and B tumors lack the VIM+/CDH1-/low phenotype. This phenotype was observed in 16.5% of the HER2+ tumors and in 60% of the TNBC tumors (p = 0.0001). Out of a total of 20 TNBC tumors, the CK5 (basal-like marker) was positive in 11 of them. The VIM+/CDH1-/low phenotype was observed in 5 CK5+ TNBC tumors (45%) and in 7 out of 9 CK5- TNBC tumors (78%) (p = 0.02). The median Ki67 index in the VIM+/CDH1-/low tumors was 13.6 (range: 17.8-45.4) compared with 9.8 (range: 4.1-38.1) in other tumors (p = 0.0007). The presence of lymph nodemetastasis was less frequent in patients with VIM+/CDH1-/low tumors (23% versus 61%; X2 test; p = 0.01). Conclusion Our findings suggest that the expression of VIM and CDH1 can identify a subset of IDCs of the breast with a mesenchymal phenotype associated with poor prognosis, high-grade lesion, and high mitotic index.

Resumo Objetivo O uso de marcadores moleculares pode identificar subtipos tumorais com diferentes taxas de recidiva. O objetivo do presente estudo é caracterizar a expressão imunohistoquímica da vimentina (VIM), da E-caderina (CDH1) e de CK5 em pacientes com carcinoma ductal invasivo (CDI) da mama. Métodos Utilizamos uma matriz de amostras teciduais (TMA, na sigla em inglês) de 87 pacientes com CDI da mama. Para avaliar a expressão dos receptores de estrogênio (RE) e receptores de progesterona (RP), HER2, VIM, CDH1, CK5 e Ki67, utilizamos imunohistoquímica. Os tumores foram classificados como luminal A e B (n = 39), HER2+ (n = 25) e triplo negativo (TNBC) (n = 23). Resultados Foi observado que tumores luminais A e B não expressaram o fenótipo VIM+/CDH1-/low. Este fenótipo foi observado em 16,5% dos tumores HER2+ e em 60% dos tumores TNBC (p = 0,0001). Dos 20 tumores TNBC, a CK5 (marcador de tumor basalóide) foi super expressa em 11 amostras. O fenótipo VIM+/CDH1-/low foi observado em 5 tumores CK5+ TNBC (45%) e em 7 dos 9 tumores CK5- TNBC (78%) (p = 0,02). A expressão média de Ki67 nos tumores VIM+/CDH1-/low foi 13.6 (amplitude de 17,8 a 45,4) comparado com 9,8 (amplitude de 4,1 a 38,1) nos outros tumores (p = 0,0007). A presença demetástase linfonodal foimenor em tumores com fenótipo VIM+/CDH1-/low (23% contra 61%; teste X2; p = 0,01). Conclusão Nossos achados sugerem que a expressão de VIM e CDH1 pode identificar um subtipo de CDI da mama com fenótipo mesenquimal associado a pior prognóstico, lesões de alto grau e alto índice mitótico.

Avaliação do efeito do tratamento quimioterápico sobre eventos celulares relacionados com a metástase no osteossarcoma / Evaluation of chemotherapy effect on cellular events related to metastasis in osteosarcoma

O osteossarcoma é o tumor maligno primário mais frequente do osso e afeta principalmente os ossos dos membros inferiores de crianças e adolescentes. Embora o tratamento quimioterápico seja realizado com a combinação de fármacos, como doxorrubicina (DOX), cisplatina (CIS) e metotrexato (MTX), os pacientes desenvolvem com frequência metástases e recidiva. A transição epitéliomesenquimal (EMT) é um processo no qual as células epiteliais sofrem alterações bioquímicas, assumindo o fenótipo de células mesenquimais, que pela maior capacidade migratória e maior potencial de invasão está relacionada com o desenvolvimento de metástases. O objetivo geral deste estudo foi investigar a ocorrência de metástase em pacientes portadores de osteossarcoma e avaliar o efeito do tratamento quimioterápico in vitro sobre processos celulares relacionados com a metástase. Especificamente, analisamos (i) o momento da ocorrência da metástase em pacientes portadores de osteossarcoma em relação ao tratamento quimioterápico; (ii) a expressão de biomarcadores de EMT (E-caderina, claudina-1, zona ocludina (ZO-1), snail, N-caderina, ß-catenina, slug e vimentina) em células primárias de osteossarcoma isoladas de seis pacientes antes e após o tratamento quimioterápico e (iii) o efeito in vitro de agentes farmacológicos utilizados em protocolos de quimioterapia do osteossarcoma sobre a expressão dos biomarcadores de EMT e sobre a migração celular em culturas primárias estabelecidas a partir de amostras tumorais. As metástases ocorreram em 57,5% dos pacientes, sendo que dentre estes em 73,7% ocorreu na vigência do tratamento quimioterápico. A identidade óssea das culturas primárias foi conferida pela expressão de osteoprotegerina. Não houve diferença na expressão dos marcadores de EMT antes e depois da quimioterapia. Embora sem significância estatística, houve redução na expressão do marcador snail, E-caderina e ZO-1. Os marcadores mesenquimais (E-catenina, slug) e epitelial (claudina-1) permaneceram estáveis ou aumentaram ligeiramente (N-caderina e vimentina) depois da quimioterapia. No experimento in vitro a maior expressão de N-caderina e de vimentina ocorreu nas células tratadas simultaneamente com todos os agentes. A maior expressão de snail e slug foi observada na exposição isolada ao metotrexato. A expressão de Ecatenina não diferiu entre os diferentes tratamentos. Embora os resultados do presente estudo não nos permitam avançar no conhecimento sobre os mecanismos que controlam e regulam a evolução clínica do osteossarcoma, acreditamos que demos o passo inicial no sentido de definir marcadores, que potencialmente possam ser utilizados na caracterização biológica das diversas variantes do osteossarcoma e, desta forma, atuar com maior precisão no acompanhamento clínico e biológico da doença

Osteosarcoma is the most common primary malignant bone tumor and affects mainly the bones of the lower limbs in children and adolescents. Although chemotherapy is carried out with a combination of drugs such as doxorubicin (DOX), cisplatin (CIS) and methotrexate (MTX), patients often develop metastasis and recurrence. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a process in which epithelial cells undergo biochemical changes, assuming the phenotype of mesenchymal cell with higher migration ability and increased potential for invasion and thus, to the development of metastasis. The aim of this study was to investigate the occurrence of metastasis in patients with osteosarcoma and evaluate the in vitro effect of chemotherapy on cellular processes related to metastasis. Specifically, we analyzed (i) the time of occurrence of metastasis in patients with osteosarcoma in relation to chemotherapy; (ii) expression of EMT biomarkers (E-cadherin, claudin-1, occludin zone (ZO-1), snail, N-cadherin, ß-catenin, slug and vimentin) in isolated osteosarcoma primary cells from six patients before and after chemotherapy and (iii) the in vitro effect of pharmacological agents used in chemotherapy protocols for osteosarcoma on the expression of EMT biomarkers and on cell migration both in primary cultures established from tumor samples. Metastasis occurred in 57.5% of patients and in 73.7% it took place during chemotherapy. Bone identity of primary cultures was conferred by osteoprotegerin expression. There was no difference in the expression of EMT markers before and after chemotherapy. Although not statistically significant, there was a reduction in the expression of markers snail, E-cadherin and ZO-1. The mesenchymal markers (ß-catenin, slug) and epithelial marker claudin-1 remained stable or increased slightly (N-cadherin and vimentin) after chemotherapy. In the in vitro experiment, most N-cadherin and vimentin expression occurred in cells treated simultaneously with all agents. The greatest expression of snail and slug was observed in isolated exposure to methotrexate. The ß-catenin expression did not differ between the different treatments. Although the results of this study do not allow us to advance in the knowledge about the mechanisms that control and regulate the clinical progression of osteosarcoma, we believe that we have taken the first step to define markers that may potentially be used in the biological characterization of the different variants of osteosarcoma and thus operate with greater precision in biological and clinical monitoring of the disease

Carcinomas uroteliais de bexiga: aspectos anatomopatológicos e imuno-histoquímicos. Pesquisa de metaloproteinases de matriz utilizando a técnica de tissue microarray (TMA) / Urothelial carcinomas of the urinary bladder: morphological and immunohistochemical aspects. Expression of the matrix metalloproteinases using the tissue microarray (TMA) technique

OBJETIVOS: Estudar variáveis anatomopatológicas relacionadas à progressão tumoral em carcinomas uroteliais primários de bexiga e sua associação com a imunoexpressão de metaloproteinases de matriz (MMPs) - 2, -9 e -14 no epitélio e no estroma dos tumores primários e nas metástases linfonodais. MÉTODOS: Sessenta e um casos de carcinomas uroteliais musculoinvasivos ou localmente avançados primários da bexiga operados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo, sendo 34 casos com metástase para linfonodo regional, foram caracterizados quanto ao gênero, idade, tamanho, focalidade, grau histológico, tipo/configuração neoplásica, tipo papilífero da neoplasia, padrão arquitetural de invasão tumoral, grau de atipia nuclear, componente sarcomatoide, diferenciações escamosa e glandular, variante histológica, invasões linfovascular e perineural, carcinoma in situ, estádio do tumor primário, metástase para linfonodo regional, tamanho da metástase e extensão extranodal. Amostras teciduais de 1,0 mm foram dispostas em micromatrizes teciduais (TMA) para pesquisa imuno-histoquímica (IH) das enzimas MMP-2, MMP-9 e MMP-14. A expressão IH das MMPs foi graduada em uma escala semiquantitativa de 0 (ausência de expressão) até 20 (maior expressão). As associações entre a imunoexpressão das MMPs de forma global, no epitélio e estroma do tumor primário e na metástase linfonodal com as variáveis anatomopatológicas foram avaliadas através do teste do qui-quadrado de Pearson, sendo consideradas significativas ao nível de p<0,05. RESULTADOS: Trinta e seis, 57 e 60 casos do tumor primário foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. Nas metástases linfonodais, 20, 27 e 26 casos foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. A imunoexpressão global de MMP-2 no tumor primário mostrou-se associada com o padrão arquitetural de invasão (p=0,022) e sua expressão no estroma com o grau de atipia...

OBJECTIVES: To study morphological features related to tumor progression in urothelial carcinoma of the urinary bladder and its association with immunohistochemical (IHC) expression of matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9 and -14 in epithelial and stromal cells of primary tumor and regional lymph node metastases. METHODS: Sixty-one cases of muscle-invasive or locally advanced urothelial carcinomas of the bladder operated on Clinic's Hospital of Faculty Medicine Sao Paulo University and the Cancer Institute of the State of Sao Paulo, with 34 cases showing regional lymph nodes metastases, were characterized regarding gender, age, tumor size, multifocality, histological grade, neoplastic type/configuration, papillary type, architectural pattern of invasive tumor, nuclear atypia, sarcomatoid component, squamous and glandular diffentiation, histological variants, lymphovascular and perineural invasion, carcinoma in situ, tumor stage, metastases to regional lymph nodes, metastases size and extranodal extension. Tissue samples of 1.0 mm were arranged in tissue microarrays blocks (TMA) for IHC detection of MMP-2, MMP-9 and MMP-14. The grading of expression of MMPs was determined to a semiquantitative scale from 0 (absence) to 20 (higher expression). The associations between the IHC global expression of MMPs, in epithelium and in stromal cells of the primary tumor and in the lymph node metastases with the morphological features were obtained through Pearson's chi-square (significant at p<0.05). RESULTS: Thirty-six, 57 and 60 cases of primary tumor were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. In the lymph nodes metastases, 20, 27 and 26 cases were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. The global IHC expression of MMP-2 in primary tumor has been associated with the architectural pattern of invasion (p=0.022). The expression in stromal cells were correlated with the degree of nuclear atypia (p=0.032) and the percentage of sarcomatoid...